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一、石蠟切片
1??烤片
將石蠟切片按同一朝向放置在切片架上，將其放入55℃的恒溫箱中烤片30分鐘；同時(shí)將脫蠟液1缸一起放入55℃的恒溫箱中；
2??脫蠟至水
將石蠟切片連同切片架一起放入脫蠟液1缸中,再一起從恒溫箱中取出置于常溫，5分鐘后，將切片取出浸入到常溫脫蠟液2缸中，并按照脫蠟液2、脫蠟液3、無(wú)水乙醇1、無(wú)水乙醇2、無(wú)水乙醇3也可以選擇梯度濃度乙醇的順序依次將石蠟切片放入缸中，每缸5分鐘；用流水清洗切片5分鐘；
3??抗原修復(fù)
在高壓鍋中，加入抗原修復(fù)液，高火預(yù)熱；待修復(fù)液沸騰后將切片置于其中，并完全浸泡組織，蓋好鍋蓋，扣上壓力閥，高火繼續(xù)加熱；
待限壓閥開(kāi)始轉(zhuǎn)動(dòng)噴氣后調(diào)至中火，同時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)2分鐘；計(jì)時(shí)結(jié)束后離開(kāi)熱源，自然降壓后將高壓鍋移入冷水中緩慢冷卻。待修復(fù)液溫度降至室溫后，用緩沖液PBS洗滌3次，每次1min。
6大技巧總結(jié)及注意事項(xiàng)
?流水清洗時(shí)水流不能直接對(duì)著切片；
?操作過(guò)程中需一直保持切片處于濕潤(rùn)狀態(tài)；
?修復(fù)液需完全浸沒(méi)切片上組織；
?修復(fù)過(guò)程中嚴(yán)禁打開(kāi)儀器或中斷運(yùn)行程序；
?修復(fù)完成后避免快速冷卻；
?修復(fù)液可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求自行選用修復(fù)液。
二、冰凍切片
1??樣本在OCT包埋液中進(jìn)行速凍（OCT的配方針對(duì)Optimal Cutting Temperature進(jìn)行了優(yōu)化）；
2??冰凍塊固定在組織卡盤(pán)（chuck）中，并固定在切片組件上；
3??切片厚度為10-20μm，逐片收集；
4??擦去多余的OCT，用組化筆勾畫(huà)組織的疏水邊界。
注意事項(xiàng)
?切片晾干10-15min，以防止切片在后續(xù)洗滌步驟中脫片。
文章出自：免疫熒光組織切片實(shí)驗(yàn) 想了解更多請(qǐng)關(guān)注：http://m.domipay.cn/
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